Skip to main content
فهرست مقالات

جداسازی،کلونینگ و بررسی ویژگی های بیوانفورماتیکی ژن دلتا15 دسچوراز از مخمر Pichia pastoris GS115 جهت افزایش تولید اسید چرب آلفالینولنیک اسید در دانه های روغنی

نویسنده:

(11 صفحه - از 409 تا 419)

چکیده:

اسیدآلفالینولنیک یکی از اجزای تشکیل دهنده اسیدهای چرب امگا۳ می باشد که برای حفظ سلامت بدن انسان ضروری بوده ولی در داخل بدن انسان ساخته نمی شوند. هدف از این پژوهش همسانه سازی ژن دلتا15دسچوراز به منظور افزایش تولید اسیدآلفالینولنیک در گیاهان دانه روغنی می باشد. بدین منظور، پس از استخراج RNA و سنتز cDNA از مخمر پیکیا پاستوریس سویه GS115، این ژن توسط پرایمرهای اختصاصی حاوی توالی کوزاک تکثیر، و جهت توالی یابی در وکتورPTZ57R/T همسانه سازی شد. قطعه نوترکیب پس از تایید توالی از وکتور TA جدا و به pBluescript KS(+) حاوی پروموتر ناپین الحاق شد. سپس سازه ژنی طراحی شده جهت انتقال به گیاه، در ناقل دوگانه pBI121 همسانه سازی و به آگروباکتریوم تومیفاسینس سویه LBA4404، منتقل شد. خصوصیات بیوانفورماتیکی ژن مورد بررسی توسط ابزارهایی مانندTopPred TMHMM,، ProtParam وSOPMA بررسی گردید. نتایج واکنش PCR و تکثیر قطعه ای به طول bp1246 صحت همسانه سازی این ژن را تایید کرد. همچنین تکثیر قطعه ای به طول bp 1210 توسط پرایمرهای داخلی پروموتر ناپین و ژن دلتا 15دسچوراز، و نیز ایجاد قطعه bp 2145 در هضم آنزیمی، تاییدی بر الحاق صحیح این ژن در امتداد پروموتر ناپین بود. نتایج توالی یابی نوکلئوتیدی نشان داد که توالی کد کننده این آنزیم مشتمل بر 1246 نوکلئوتید و کد کننده 415 اسید آمینه می باشد. آنالیز توالی آمینواسیدی وجود دو دومین و 5 هلیکس تراغشایی را تایید کرد. همچنین پیش بینی خواص پروتئینی، بررسی سیگنال پپتیدها و ساختار دوم، ثابت کرد که این آنزیم جزء آنزیم های پایدار و غشایی می باشد.

Alpha-linolenic acid is an omega-3 fatty that is essential for maintaining a healthy body but can't produce in the human body. The oils of some oilseeds، as well as some plants are the main sources of alpha-linolenic acid but the content of alpha-linolenic acid، in important oilseed plants like soybean and rapeseed are relatively low. The aim of this study was the cloning of Delta 15 Desaturase gene to increase alpha-linolenic acid production in the oilseed plants. For this purpose، after extracting total RNA and cDNA synthesisfrom Pichia pastoris GS115، the genewas amplified using gene-specific primers containing Kozak sequence and then cloned in PTZ57R / T vector and transformed into E.coli strain DH5α. After sequencing، the recombinant fragment was isolated from TA vector and was cloned into pBluescript KS(+) vector containing Napin promoter. The designed gene construct was cloned in pBI121 binary vector and then was transformed into Agrobacterium tumefaciens strain LBA4404. Bioinformatics characterization of the target gene was investigated by servers TopPred، TMHMM، ProtParam and SOPMA. The results of the colony PCR and amplification of the 1246 bp fragment، confirmed the accuracy of the gene cloning. The amplification of a 1210 bp fragment using an internal primer of napin promoter and Delta 15 desaturase، as well as the production of the 2145 bp fragment in enzymatic digestion confirmed the correct incorporation of the gene along with Napin promoter. Nucleotide sequencing results showed that the cloned CDS include 1246 nucleotides and translated to a protein with 415 amino acids. The amino acid sequence analysis confirmed the presence of two domains and five Transmembrane helices. Also، prediction of the protein's properties، signal peptides، and the second structure، proved that this enzyme is stable transmembrane enzymes.

کلیدواژه ها:

ژن کلونینگ ،اسیدآلفالینولنیک ،دلتا 15 دسچوراز ،پیکیا پاستوریس

Gene cloning ،Delta 15 Desaturas ،Pichia pastoris ،ALPHA ،linolenic acid


برای مشاهده محتوای مقاله لازم است وارد پایگاه شوید. در صورتی که عضو نیستید از قسمت عضویت اقدام فرمایید.